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THP-1培养细节你都了解吗?

作者:上海中乔新舟生物科技有限公司 2025-02-25T00:00 (访问量:220)

细胞简介
该细胞从一名1岁的患有急性单核细胞性白血病的男孩的外周血中分离建立。该细胞可以吞噬乳胶颗粒和激活的红细胞,细胞膜和胞浆内均没有免疫球蛋白,表达C3R和FcR;可受佛波酯TPA诱导向单核系方向分化;可作为转染宿主。
 图片
细胞信息
细胞名称:Thp-1人单核细胞白血病
生长特性:悬浮、低密度容易聚团,高密度分散
倍增时间:60-70 小时 (PubMed= 6970727 ); 26 小时 (PubMed= 25984343 ); ~35-50 小时 (DSMZ=ACC-16)
换液频次:2~3次/周
 传代比例:1:2-1:4(具体情况视实际细胞量决定)细胞密度在8X106/ml 进行传代,不要超过1X106/ml   
培养基推荐配方 :RPMI-1640(中乔新舟 货号:ZQ-200)+10%胎牛血清(中乔新舟 货号:ZQ0500+1%双抗(中乔新舟   货号:CSP006+β-Mer 终浓度:0.05mM(中乔新舟  货号:CSP005,例:500ml添加500ul)
 
β-Mer(巯基乙醇)的作用β-巯基乙醇是一种常用的培养补充剂,有抗氧化的作用,可减少氧化应激对THP-1细胞的影响。当细胞密度过大但需要维持时,可适当增加巯基乙醇的比例(不超过标准量的1.5倍)。

              (该图片引用ATCC细胞培养参考图)
THP-1细胞复苏
THP-1细胞复苏后通常需要3-5天恢复状态,细胞对密度有一定依赖性,如果复苏时离心去除了冻存液,建议复苏后48小时内不要进行操作。密度低时细胞会抱团生长属于细胞快速增殖生长的一个阶段,是正常情况。
THP-1细胞的传代
A、THP-1细胞为悬浮细胞且具有低密度依赖性,当细胞密度达到8×105个活细胞/ mL时需要进行传代。细胞密度不要超过1×106活细胞/ mL。
B、比例一般为1:2-4,可以分瓶后补充培养液,不需要离心,t25培养瓶分瓶后补充新鲜完全培养基到7ml,
C、如果对悬浮细胞密度把控不好,最佳的方式是进行细胞计数。
D、培养一周左右可以离心一次,以去除一些死细胞。

( 中乔新舟出库细胞图4X ,该图片室温放置5min拍照,该密度可进行传代,细胞计数密度为1.2X106/ml)
 
THP-1细胞的冻存
A、用10%DMSO:900ul FBS + 100ul DMSO (有毒小心操作)或直接用无血清细胞冻存液。
B、收集生长状态较好的细胞于15 mL离心管中,调整细胞浓度至细胞数量大约200万-300万/mL冻存液为宜。
C、根据情况放入-80℃培养箱最多放置3个月,尽快转移到液氮中进行长期保存。
THP-1培养常见问题
1、THP-1细胞在培养过程中细胞发生聚团怎么办?
少量细胞聚团,呈葡萄串状,属于正常现象,特别是细胞密度较低时,易出现这种情况。密度高时,细胞会自然分散开,如果密度高聚团还是很严重,通过观察细胞状态、巯基乙醇添加量、或更换血清品牌或增大血清比例(不超过20%)有助于解决聚团问题。
2、THP-1细胞在培养过程中细胞发生贴壁怎么办?
 
(中乔新舟细胞客户咨询图)
2.1 THP-1细胞培养过程中出现少量细胞贴壁属于正常情况,不需要担心。可以轻吹收集细胞或者丢弃贴壁部分细胞。
2.2 但如果当贴壁细胞比例高于20%,说明细胞生长环境有异常,这时候就需要排查培养箱温度及CO2浓度、培养基成分以及培养器皿是否异常。可用非TC处理过的培养瓶,不利于细胞贴壁。
 
3、THP-1复苏不起来怎么办
3.1 该细胞冻存后复苏率较低,冻存时请酌情提高细胞量,冻存时活细胞密度不能低于100万-300万/mL,同时复苏密度也有依赖性,细胞复苏后需要培养3-5天状态才能恢复,如有细胞碎片,待细胞密度增大后通过低速离心去除。
3.2该细胞为悬浮细胞,在培养时更喜欢温和处理,细胞密度低时,培养时尽量少对细胞进行离心处理以此造成对细胞的伤害。换液时不要全培养基更换。 
3.3 THP-1细胞中需要添加β-巯基乙醇,现用现配,不可直接添加至完培中长期储存,会影响β-巯基乙醇的稳定性。

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